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metadata.dc.type: Dissertação
Title: Toxicidade e potencial antitumoral do análogo da piperina 2-oxo-2-(4-nitrofenilamina)-piperinoato de etila em modelo experimental de tumor ascítico de ehrlich
metadata.dc.creator: Santos, Jephesson Alex Floriano dos
metadata.dc.contributor.advisor1: Sobral, Marianna Vieira
metadata.dc.description.resumo: O câncer é um problema de saúde pública mundial, associado a uma elevada taxa de insucesso na terapêutica, o que está relacionado a aspectos como efetividade, toxicidade, farmacocinética e resistência por parte das células tumorais. Nesse contexto, produtos naturais continuam exercendo importante papel como protótipos para a síntese de novos candidatos a fármacos. A piperina é um alcaloide amida, isolada de espécies de Piper, que apresenta atividade antitumoral, entretanto possui significante toxicidade. Com o objetivo de potencializar a sua atividade e reduzir a toxicidade, vários análogos inéditos estão sendo estudados, dentre estes o 2-oxo-2-(4-nitrofenilamina)-piperinoato de etila (HE02). Esse trabalho objetivou investigar a atividade antitumoral, bem como a toxicidade do HE02. No ensaio de hemólise, HE02 induziu apenas 5,01% de hemólise na maior concentração testada (1000 μg/mL), apresenta baixa citotoxicidade em eritrócitos de camundongos. Já em linhagem de células RAW 264.7, HE02 induziu 49,75% de citotoxicidade após tratamento com 1000 μg/mL. No ensaio de toxicidade pré-clínica aguda, a dose letal 50% (DL50) foi estimada em torno de 2000 mg/kg, o que permitiu a escolha de doses seguras a serem usadas no ensaio farmacológico. Em modelo de tumor ascítico de Ehrlich, HE02 (12,5 ou 25 mg/kg) apresentou atividade antitumoral por reduzir os parâmetros viabilidade e total celular (p<0,05), sem alterar o volume e massa tumorais. Na análise do perfil do ciclo celular, HE02 (12,5 mg/kg) induziu pequeno aumento no pico sub-G1 (p<0,05), de apenas 10% em relação ao controle, mostrando que alterações no ciclo celular não representam um mecanismo importante no efeito antitumoral de HE02. O tratamento com HE02 (12,5 mg/kg) reduziu a microdensidade vascular peritumoral (p<0,05), indicando ação antiangiogênica. Com relação a avaliação de citocinas do microambiente tumoral observou-se que HE-02 aumentou as concentrações de IL-1β, TNF-α e IL-12, ao passo que reduziu as citocinas IL-4 e IL-10 (p<0,05). Além disso, HE02 induziu aumento das concentrações de espécies reativas de oxigênio (ROS) e óxido nítrico (NO) no fluido peritoneal (p<0,05 para ambos). Esses dados sugerem que HE02 promove modulação do sistema imune no sentido de estimular um perfil de linfócitos T helper 1 (Th1), que é citotóxico para as células tumorais. No que diz respeito a avaliação da toxicidade no modelo de carcinoma de Ehrlich, foi observado redução do peso corporal, além de aumento da ureia, porém o dano renal foi descartado pela análise histológica dos rins. Ainda, foi observado leucocitose acompanhada de neutrofilia e linfopenia. Esses resultados conjuntos que HE02 apresenta baixa toxicidade e atividade antitumoral in vivo por estimulação do sistema imune.
Abstract: Cancer is a worldwide public health problem, associated to an elevated rate of failure in therapy, which is related to aspects such as effectiveness, toxicity, pharmacokinetics and resistance by tumor cells. In this context, natural products still have a big part as prototypes to the synthesis of new drug candidates. The piperine is an amide alkaloid, isolated from species of Piper, which shows antitumor activity, however it has significant toxicity. In order to potentiate its activity and reduce the toxicity, several unpublished analogues are being studied, among them the 2-oxo-2-(4-nitrophenylamine) ethyl piperinoate (HE-02). This work aimed to investigate the antitumor activity as well as the toxicity of the HE-02. In the hemolysis experiment, HE-02 inducted only 5,01% of hemolysis on the higher concentration tested (1000ug/mL), suggesting low cytotoxicity in mouse erythrocytes. In RAW 264.7 cell lines, HE-02 inducted 49,75% of cytotoxicity after treatment with 1000ug/mL. In the pre-clinical test of toxicity, the 50% lethal dose (LD50) was estimated around 2000 mg/kg, which allowed the choice of safe doses to be used in the pharmacological test. In the Ehrlich ascites tumor model, HE-02 (12,5 or 25 mg/kg) showed antitumor activity by reducing viability and total cell parameters (p<0,05), without altering tumor volume and mass. In the analysis of the cell cycle profile, HE-02 (12,5 mg/kg) induced a small increase of only 10% in the sub-G1 peak (p<0,05) in relation to the control, suggesting that alterations in the cell cycle do not represent an important mechanism in the antitumor effect of HE-02. The treatment with HE-02 (12,5 mg/kg) reduced the peritumoral vascular microdensity (p<0,05), indicating antiangiogenic action. Regarding the evaluation of cytokines of the tumor microenvironment, it was observed that HE-02 increased the concentrations of IL-1β, TNF-α and IL-12, while reducing IL-4 and IL-10 cytokines (p<0,05 for all). In addition, HE-02 induced the increase of concentrations of reactive oxygen species (ROS) and nitric oxide (NO) in the peritoneal fluid (p<0,05). These data together suggest that HE-02 promotes modulation of the immune system in the sense of stimulating a profile of T helper lymphocyte 1 (Th1), which is cytotoxic to tumor cells. Regarding the evaluation of toxicity in the Ehrlich carcinoma model, a reduction in body weight was observed in addition to an increase in urea, but kidney damage was ruled out by histological analysis of the kidneys. Furthermore, leukocytosis was observed, accompanied by neutrophilia and lymphopenia. These results suggest that HE-02 shows low toxicity and antitumor activity in vivo by stimulation of the immune system.
Keywords: Piperina
Atividade antitumoral
Toxicidade
Antitumor activity
Piperine
Toxicity
metadata.dc.subject.cnpq: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::FARMACOLOGIA
metadata.dc.language: por
metadata.dc.publisher.country: Brasil
Publisher: Universidade Federal da Paraíba
metadata.dc.publisher.initials: UFPB
metadata.dc.publisher.department: Farmacologia
metadata.dc.publisher.program: Programa de Pós-Graduação em Produtos Naturais e Sintéticos Bioativos
metadata.dc.rights: Acesso Aberto
Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazil
metadata.dc.rights.uri: http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/
URI: https://repositorio.ufpb.br/jspui/handle/123456789/12320
Issue Date: 22-Feb-2017
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