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metadata.dc.type: Tese
Title: Mancha marrom de alternativa em tangerineira 'Dancy': Aspectos morfofisiológicos, variabilidade genética e indução de resistência
metadata.dc.creator: Demartelaere, Andréa Celina Ferreira
metadata.dc.contributor.advisor1: Nascimento, Luciana Cordeiro do
metadata.dc.contributor.advisor-co1: Corrêa, Élida Barbosa
metadata.dc.description.resumo: A diversidade genética do fungo Alternaria alternata (Fr:Fr) Keissler f. sp. citri está associada aos fatores genéticos e ambientais e tem-se verificado influência na reprodução deste patógeno, responsável por causar sérios problemas econômicos em frutos e em mudas de tangerineira ‘Dancy’ (Citrus tangerina hort. ex Tanaka) no Estado da Paraíba. Entretanto, para o controle da mancha marrom de alternaria (MMA) são empregadas táticas dentro do manejo integrado utilizando produtos alternativos como o extrato etanólico de pau-ferro (Caesalpinia ferrea (Benth.)) Ducke, Quitosana® e o antagonista Trichoderma asperellum. Foram realizados três experimentos sendo que o primeiro no LAFIT e LAPOA, onde foi feito o teste in vitro, submetendo-se trinta isolados aos meios V8 ágar, extrato de folha ágar (EF), aveia dextrose ágar (ADA), batata dextrose ágar (BDA), nas temperaturas de 15, 25 e 35 ºC e regimes de luz, escuro e luz contínua e luz alternada, incubados em B.O.D. O crescimento micelial (CM) foi avaliado em intervalos de 24 horas até sete dias e a esporulação foi quantificada em câmara de Newbauer e ajustada a 105 esporos/mL. Em seguida, foi feita a caracterização molecular com 38 isolados por meio de marcadores ISSR e a similaridade genética quantificada pelo índice de Jaccard. O delineamento experimental utilizado na caracterização morfofisiológica foi o inteiramente casualizado em arranjo fatorial, 30 isolados, quatro meios de cultura: AV, BDA, EF e V8, três regimes de luz: claro contínuo, luz alternada e luz contínua e três temperaturas: 15, 25 e 35 ºC com 12 repetições, constituíndo um total de 12.960 placas de Petri, considerando uma placa de Petri por repetição. A análise de variância dos isolados foi realizada através do teste F (p ≤ 0,05). As médias gerais foram comparadas pelo teste Scott-Knott (p ≤ 0,05) e as demais pelo teste Tukey (p ≤ 0,05). As análises estatísticas foram realizadas utilizando os softwares SISVAR® 5.3 e SAS/STAT® 9.3. A diversidade genética nos trinta e oito isolados avaliados foi determinada com base na presença e ausência de fragmentos de DNA amplificados por três primers e visualizados em géis de eletroforese. As imagens foram processadas no software BioNumerics® para análise de similaridade genética de Jaccard. O dendrograma foi obtido pelas médias aritméticas dos grupos de isolados formados em pares de dados combinados (UPGMA). Independente do local de coleta e da condição de cultivo utilizada, todos os isolados apresentaram diferença estatística em relação ao crescimento micelial e esporulação. Os isolados de A. alternata patótipo tangerina coletados de Massaranduba-PB apresentaram alto crescimento micelial, esporulação e alta diversidade genética em relação aos demais isolados avaliados. De forma geral, o regime de luz contínuo, a 25 °C nos meios BDA e V8 foram os ideais para o crescimento micelial e esporulação dos isolados avaliados A. alternata patótipo tangerina, no entanto, escuro contínuo em meio AV foi melhor aos isolados de Pratânia-SP até o sétimo dia de avaliação. Todos os isolados apresentaram alta diversidade genética entre eles e ocorreu uma tendência de agrupamento por local demonstrada pelos marcadores morfofisiológicos e moleculares avaliados. O segundo experimento, foi realizado no LAFIT e LAPOA, onde frutos de tangerina ‘Dancy’ foram desinfestados e imersos em extrato de C. ferrea nas concentrações 0; 10; 100; 500 e 1000 μg/mL, Quitosana® a 0,5; 1,0; 1,5 e 2,0 g/L. e T. asperellum a 1010 esporos/mL. Após 24 h da aplicação dos tratamentos, foi inoculado A. alternata (105 esporos/mL) nos frutos. No segundo dia após a inoculação (DAI), foram realizadas diariamente as avaliações da severidade em frutos de tangerineira ‘Dancy’ até atingir a última escala de notas que se deu no décimo segundo dia e também verificou-se as atividades enzimáticas de fenil alanina amônia-liase, peroxidase e polifenoloxidase e a pós-colheita em frutos de tangerineira ‘Dancy’. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado com 10 tratamentos (0; 10; 100; 500 e 1000 μg/mL do extrato de C. ferrea), (0,5; 1,0; 1,5 e 2,0 g/L da Quitosana®), (1010 esporos/mL de T. asperellum) e cinco repetições de cinco frutos, constituindo uma unidade experimental com 250 frutos de tangerineira ‘Dancy’. As concentrações 500 μg/mL do extrato de C. ferrea, 1,5 g/L de Quitosana® e T. asperellum reduziram a severidade da MMA, promoveram alta atividade das enzimas fenil alanina amônia-liase, peroxidase e polifenoloxidase e em todos os tratamentos mantiveram a qualidade pós-colheita em frutos de tangerineira ‘Dancy’. O terceiro experimento, foi realizado no LAFIT e LAPOA, onde as mudas com 90 dias após a enxertia foram pulverizadas com extrato de C. ferrea nas concentrações de 0; 10; 100; 500 e 1000 μg/mL, acondicionadas em câmara úmida e mantidas em temperatura ambiente (28 ± 2 ºC). Após 24 horas da pulverização com o extrato, foi realizada a inoculação de A. alternata (105 esporos/mL) e após as 96 horas da inoculação até o vigésimo terceiro dia, foram feitas as avaliações de incidência, severidade, AACPD. Para as análises das atividades enzimática, foram retiradas três folhas/repetição no primeiro e no ultimo dia do experimento. O delineamento foi inteiramente casualizado com cinco tratamentos (0; 10; 100; 500 e 1000 μg/mL do extrato de C. ferrea) e 25 repetições, formando a unidade experimental com 125 mudas. Nos dois últimos experimentos, foram realizados análises de regressão para as concentrações dos produtos, os dados foram submetidos à análise de variância e as médias comparadas pelo teste de Dunnett (P ≤ 0,05) no programa SAS® System 9.3. Verificou-se que as concentrações 100 e 500 μg/mL do extrato de C. ferrea reduziram a incidência de A. alternata e a severidade da MMA, apresentaram baixa atividade da enzima fenil alanina amônia-liase, porém, promoveram altas atividades da peroxidase e polifenoloxidase em folhas de tangerineira ‘Dancy’.
Abstract: The genetic diversity of the fungus Alternaria alternata (Fr:Fr) Keissler f. sp. citri is associated with genetic and environmental factors and there has been influence on reproduction of the pathogen responsible for causing serious economic problems in fruit and tangerine seedlings 'Dancy' (Citrus tangerine hort. ex Tanaka) in the state of Paraíba. However, for the control of Alternaria brown spot (MMA) tactics are employed with in the integrated management using alternative products such as ethanol extract ironwood (Caesalpinia ferrea (Benth.)) Ducke, Chitosan® and the antagonist Trichoderma asperellum. Three experiments were conducted and the first was the in vitro test, submitting thirty isolates the V8 agar, leaf extract (EF), dextrose agar oats (ADA), potato dextrose agar (PDA) in temperature 15, 25 and 35 °C and light regimes, dark and continuous light and alternating light, incubated in BOD The mycelial growth (CM) was evaluated at 24 hour intervals up to seven days and sporulation was quantified in a Neubauer chamber and adjusted to 105 spores/mL. Then, the molecular characterization was done with 38 isolated by ISSR and genetic similarity quantified by Jaccard index. The experimental design used in Morphophysiological characterization was completely randomized in a factorial arrangement, 30 isolates, four culture media: AV, BDA, EF and V8, three light regimes: continuous light, alternating light and continuous light and three temperatures: 15, 25 and 35 °C with 12 reps, making a total of 12.960 Petri dishes considering a Petri dish by repetition. The variance analysis of isolates was performed using the F test (p ≤ 0,05). The overall averages were compared by the Scott-Knott test (p ≤ 0,05) and the other by the Tukey test (p ≤ 0,05). Statistical analyzes were performed using the software SISVAR® 5.3 and SAS/STAT® 9.3. The genetic diversity in this thirty eight isolates was determined based on the presence or absence of amplified DNA fragments of three primers and viewed on electrophoresis gels. The images were processed in BioNumerics® software for analysis of genetic similarity Jaccard. The dendrogram was obtained by the arithmetic average of the individual groups formed in data matched pairs (UPGMA). Independent of the collection site and growing conditions used, all isolates showed statistical differences in relation to mycelial growth and sporulation. The isolates of A. alternata pathotype tangerine collected from Massaranduba-PB showed high mycelial growth, sporulation and high genetic diversity compared to other tested isolates. In general, the continuous light regime at 25 °C on PDA and V8 media was ideal for the mycelial growth and sporulation of the isolated A. alternata this pathotype tangerine, however, continuous darkness among the best AV was isolated from Pratânia-SP until the seventh valuation day. All isolates showed high genetic diversity among them and there was a grouping of tendency by location shown by markers morphophysiological and molecular aspects evaluated. The second experiment was conducted in LAFIT and LAPOA, mandarin fruit 'Dancy' were disinfected and immersed in C. ferrea extract at concentrations of 0; 10; 100; 500 and 1000 μg/mL, 0,5 Chitosan®; 1,0; 1,5 to 2,0 g/L. and T. asperellum to 1010 spores/mL. After 24 h the application of with the extracts was inoculated A. alternata (105 spores/mL) in fruits. On the second day after inoculation (DAI) were performed daily the severity assessments in fruits of tangerine 'Dancy' until the last grading scale that occurred on the twelfth day and also. For the analysis of enzyme activities of phenylalanine ammonia-lyase, peroxidase and polyphenol and post-harvest fruit tangerine 'Dancy'. The design was completely randomized with 10 treatments (0; 10; 100; 500 and 1000 μg/mL of C. ferrea extract), (0,5; 1,0; 1,5 and 2,0 g/L of Chitosan®) (1010 spores/mL T. asperellum) and five replicates of five fruits, constituting an experimental unit with 250 fruit tangerine 'Dancy'. The concentrations of 500 μg/mL C. ferrea extract, 1,5 g/L Chitosan® and T. asperellum reduced the severity of MMA promoted high activity of the enzyme phenylalanine ammonia-lyase, peroxidase and polyphenol oxidase and all treatments kept the postharvest quality in fruits of tangerine 'Dancy'. The third experiment was conducted in LAFIT and LAPOA, the plants 90 days after grafting were sprayed with C. ferrea extract at concentrations of 0; 10; 100; 500 and 1000 μg/mL, placed in a humid chamber and maintained at room temperature (28 ± 2 °C). After 24 hours of spraying was carried out the inoculation of A. alternata (105 spores/mL) and after 96 hours of inoculation until the twenty third day, the incidence were made reviews, severity AUDPC and analysis of enzymatic activities. For the determination of phenylalanine ammonia-lyase activity, peroxidase and polyphenol, were taken three sheets/repeat in the first and last day after treatment application of the products. The design was completely randomized with five treatments (0; 10; 100; 500 and 1000 μg/mL of C. ferrea extract) and 25 repetitions, forming the experimental unit with 125 seedlings. In the last two experiments, regression analyzes were performed for the concentrations of C. ferrea extract the data were submitted to analysis of variance and the means compared by Dunnett test (P ≤ 0,05) in SAS® System 9.3 program. It was found that the concentrations of 100 and 500 μg/mL C. ferrea extract reduced the incidence and severity A. alternata MMA, showed low activity of the enzyme phenylalanine ammonia- lyase, however, promoted high peroxidase activity and polyphenol oxidase in leaves of tangerine 'Dancy'.
Keywords: Alternaria alternata
Citrus tangerina
Extração de DNA
metadata.dc.subject.cnpq: CNPQ::CIENCIAS AGRARIAS::AGRONOMIA
metadata.dc.language: por
metadata.dc.publisher.country: Brasil
Publisher: Universidade Federal da Paraíba
metadata.dc.publisher.initials: UFPB
metadata.dc.publisher.department: Ciências Fitotecnia e Ciências Ambientais
metadata.dc.publisher.program: Programa de Pós-Graduação em Agronomia
metadata.dc.rights: Acesso Aberto
Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazil
metadata.dc.rights.uri: http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/
URI: https://repositorio.ufpb.br/jspui/handle/123456789/14531
Issue Date: 4-Dec-2015
Appears in Collections:Centro de Ciências Agrárias (CCA) - Programa de Pós-Graduação em Agronomia

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