Repositório Institucional da UFPB
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https://repositorio.ufpb.br/jspui/handle/123456789/26992| Tipo: | Dissertação |
| Título: | Tripsinas do peixe guarajuba (Carangoides bartholomaei): extração, purificação e caracterização |
| Autor(es): | Silva, Thalia Andrade |
| Primeiro Orientador: | Freitas Júnior, Augusto Cézar Vasconcelos de |
| Primeiro Coorientador: | Costa, Helane Maria Silva da |
| Resumo: | Nos últimos anos o consumo de pescado vem aumentando e sua produção quase triplicou nas últimas décadas. Neste contexto, a espécie Carangoides bartholomaei é um peixe marinho de médio a grande porte muito consumido no litoral nordestino. O acúmulo de resíduos gerados pelo processamento do pescado consumido gera um problema ambiental, causando poluição das águas e do solo quando descartados indevidamente. Entretanto, diversos estudos mostram que esses resíduos podem ser importantes fontes de moléculas bioativas que podem ser aplicadas em processos biotecnológicos e industriais. Com isso, o objetivo deste estudo foi extrair, purificar e caracterizar proteases alcalinas, do tipo tripsina, presentes no ceco pilórico do peixe C. bartholomaei. As tripsinas foram purificadas através de “salting out” e cromatografia líquida de afinidade. A atividade enzimática foi determinada utilizando BApNA como substrato. Os efeitos de agentes químicos, pH e temperatura sobre a atividade enzimática foi avaliado. Foi avaliada a compatibilidade das tripsinas obtidas com sabões comerciais. As tripsinas de C. bartholomaei apresentaram características importantes como temperatura ótima de 50°C, sendo estáveis entre 25°C a 40°C por 60 minutos. O pH ótimo para a atividade enzimática foi o pH 8,0 e foi estável do pH 5,0 ao pH 11,5. O Km foi determinado como 0,73 mM para o BApNA. As tripsinas foram inibidas completamente pelo inibidor TLCK. O HgCl2 inibiu fortemente a atividade enzimática em todas as concentrações testadas, enquanto que o AlCl3 em maiores concentrações promoveu uma leve ativação. Através de SDS-PAGE foi possível observar duas bandas após a cromatografia de afinidade: uma de 20 kDa e outra de 24 kDa. Os testes feitos com diferentes marcas de sabões comerciais mostraram que as tripsinas continuam ativas na presença dessas formulações. Os resultados sugerem que o ceco pilórico de C. bartholomaei é uma fonte para obtenção de tripsinas compatíveis com os componentes de sabões comerciais. As características físico-químicas das tripsinas obtidas sugerem que são enzimas promissoras para outras aplicações industriais e biotecnológicas. |
| Abstract: | In recent years, fish consumption has increased, and its production has almost tripled in recent decades. The species Carangoides bartholomaei is a medium to large marine fish widely consumed on the northeastern coast. Within this context, the waste accumulation generated by the processing of consumed fish causes an environmental problem due water and soil pollution when improperly discarded. However, several studies show that these wastes can be important sources of bioactive molecules that can be applied in biotechnological and industrial processes. Therefore, the aim of this study was to extract, purify and characterize trypsin-like enzymes present in the pyloric cecum of the C. bartholomaei. Trypsins were purified by salting out and affinity liquid chromatography. Enzyme activity was determined using BApNA as substrate. The effects of chemical agents, pH and temperature on enzymatic activity were evaluated. The compatibility of C. bartholomaei trypsins with commercial detergents was evaluated. The trypsins showed important characteristics such as an optimal temperature of 50 °C, being stable between 25 °C and 40 °C for 60 min. The optimal pH for enzymatic activity was pH 8.0 and it was stable from pH 5.0 to pH 11.5. The Km was determined to be 0.73 mM for BApNA. The Trypsins were completely inhibited by TLCK inhibitor. The ion HgCl2 promoted a high enzymatic inhibition at all concentrations, while AlCl3 promoted slight activation in the same concentrations. Through SDS-PAGE it was possible to identificate two bands: one of 20 kDa and another of 24 kDa. C. bartholomaei trypsins maintained high activity in the presence of commercial detergents. The results suggest that the pyloric caecum of C. bartholomaei is a source for obtaining trypsins compatible with the commercial detergents. The physicochemical characteristics of these trypsins suggest that it’s are promising enzymes in biotechnological and industrial applications. |
| Palavras-chave: | Pesca - Resíduos Proteases alcalinas Purificação de enzimas Fishing - Waste Alkaline proteases Enzymes purification |
| CNPq: | CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOLOGIA GERAL |
| Idioma: | por |
| País: | Brasil |
| Editor: | Universidade Federal da Paraíba |
| Sigla da Instituição: | UFPB |
| Departamento: | Biologia Celular e Molecular |
| Programa: | Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular |
| Tipo de Acesso: | Acesso embargado |
| URI: | http://creativecommons.org/licenses/by-nd/3.0/br/ |
| URI: | https://repositorio.ufpb.br/jspui/handle/123456789/26992 |
| Data do documento: | 29-Set-2022 |
| Aparece nas coleções: | Centro de Ciências Exatas e da Natureza (CCEN) - Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular |
Arquivos associados a este item:
| Arquivo | Descrição | Tamanho | Formato | |
|---|---|---|---|---|
| ThaliaAndradeSilva_Dissert.pdf | 1,82 MB | Adobe PDF | Visualizar/Abrir Solicitar uma cópia |
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