Repositório Institucional da UFPB
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https://repositorio.ufpb.br/jspui/handle/123456789/35538| Tipo: | TCC |
| Título: | Padronização da extração de DNA em tecidos parafinados e descalcificados |
| Autor(es): | Santos, Ana Beatriz Rodrigues dos |
| Primeiro Orientador: | Alves, Adriano Francisco |
| Resumo: | A extração de DNA é uma etapa fundamental para o fornecimento de informações essenciais sobre a genética e a patologia das doenças. Em laboratórios de Patologia, as amostras parafinadas são a principal fonte de manutenção do material biológico. A fixação do tecido em formalina e a inclusão em parafina são métodos essenciais no processo de preservação celular, sendo estas amostras, denominadas tecidos Fixados em Fo rmol e Incluídos em Parafina (FFIP). Nas amostras FFIP, devido às interações do DNA com o formol e ácido nítrico, ocorre uma dificuldade de extrair o material genético. Nesse sentido, o objetivo deste trabalho foi padronizar a extração de DNA em tecidos parafinados e descalcificados. Para isto, foram selecionados blocos de tecidos FFIP oriundos de projetos realizados no Laboratório de Imunopatologia Experimental (LABIPEX). As amostras incluem espécimes de tecidos parafinados (baço, cérebro, fígado e rim) e tecidos parafinados e descalcificados (mandíbula). A partir disto, foi realizada a padronização do protocolo de desparafinização e a de três métodos de extração de DNA, que correspondiam aos métodos: fenol-clorofórmio, salting-out e uso de micro-ondas. Para análise dos resultados foram realizadas análises quantitativas e qualitativas através do espectofôtometro modelo nanodrop 2000 e de eletroforese em gel de agarose, respectivamente. Foi possível extrair material genético apenas dos espécimes de fígado, baço e rim. As amostras de cérebro e mandíbula não obtiveram resultados significativos. Com base nas análises quantitativa e qualitativa, foi possível estabelecer o método de extração por fenol-clorofórmio, como o melhor para extração de DNA em tecidos FFIP de acordo com as condições experimentais do laboratório. Com isso, foi possível padronizar a técnica de desparafinização em tecidos FFIP, padronizar a técnica de extração de DNA em tecidos parafinados não- descalcificados e não foi possível padronizar a técnica de extração de DNA em tecidos parafinados e descalcificados. |
| Abstract: | DNA extraction is a fundamental step in providing essential information about the genetics and pathology of diseases. In Pathology laboratories, paraffin-embedded samples are the main source of biological material maintenance. Tissue fixation in formalin and inclusion in paraffin are essential methods in the process of cell preservation, with these samples being called Formalin-Fixed Paraffin-Embedded (FFPE) tissues. In FFPE samples, due to DNA interactions with formalin and nitric acid, there is difficulty in extracting genetic material. In this sense, the aim of this work was to standardize DNA extraction from paraffin-embedded and decalcified tissues. For this purpose, FFPE tissue blocks from projects carried out in the Laboratory of Experimental Immunopathology (LABIPEX) were selected. The samples include specimens of paraffin-embedded tissues (spleen, brain, liver, and kidney) and paraffin-embedded and decalcified tissues (jaw). From this, the standardization of the deparaffinization protocol and three DNA extraction methods was carried out, corresponding to the methods: phenol-chloroform, salting-out, and microwave-assisted extraction. For the analysis of the results, quantitative and qualitative analyses were performed using the Nanodrop 2000 spectrophotometer and agarose gel electrophoresis, respectively. It was possible to extract genetic material only from liver, spleen, and kidney specimens. Brain and jaw samples did not yield significant results. Based on quantitative and qualitative analyses, the phenol-chloroform extraction method was established as the best for DNA extraction in FFPE tissues according to the laboratory's experimental conditions. Thus, it was possible to standardize the deparaffinization technique in FFPE tissues, standardize the DNA extraction technique in non-decalcified paraffin-embedded tissues, and it was not possible to standardize the DNA extraction technique in paraffin-embedded and decalcified tissues. |
| Palavras-chave: | Amostras parafinadas Biologia molecular Extração de DNA. |
| CNPq: | CNPQ::OUTROS::BIOMEDICINA |
| Idioma: | por |
| País: | Brasil |
| Editor: | Universidade Federal da Paraíba |
| Sigla da Instituição: | UFPB |
| Departamento: | Fisiologia e Patologia |
| Tipo de Acesso: | Acesso aberto Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazil |
| URI: | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/ |
| URI: | https://repositorio.ufpb.br/jspui/handle/123456789/35538 |
| Data do documento: | 29-Abr-2024 |
| Aparece nas coleções: | TCC - Biomedicina |
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